重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌中

摘要：

目的:提高重组人成纤维细胞生长因子改构体在大肠杆菌工程菌表达体系E.coli BL21(DE3)/pET3c-haFGF中的表达水平.方法:从菌种和培养基筛选做起,选择了全合成的YH培养基做大肠杆菌表达体系E.coli BL21(DE3)/pET3c-haFGF的发酵培养基,并从多角度研究了其质粒的稳定性,设计了生长期不添加抗生素、诱导前离心去除β-内酰胺酶同时添加氨苄青霉素的方法,通过密码子偏爱性和定点PCR突变技术改变β-内酰胺酶的表达强度.结果:经50代传代试验,质粒分配稳定性在90%以上,PstI酶切图谱显示结构稳定性达100%,表达水平维持在25%～28%.LBAmp平板揭示了诱导过程中工程菌丧失表达能力的部分原因,诱导前离心的实验使表达水平提高13.68%,在IPTG浓度0.3 mmol/L、氨苄青霉素添加量50 μg/ml时,表达效率提高了25%.结论:本研究建立的工艺操作较为简便易行,易于放大,具有较大的经济意义.

关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子改构体、质粒稳定性、大肠杆菌、诱导、酶切图谱

所属期刊栏目：37

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重大生物医药专题滚动项目2004AA2Z3C60;浙江省温州市科技局资助项目Y2005B025;温州医学院引进人才启动基金2005-170

在线出版日期：2007-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：303-308