人α-防御素-1(α-HNP-1)基因乳腺定位表达载体的构建及表达

摘要：

目的:将人α-防御素-1(α-HNP-1)基因与山羊β-乳球蛋白(Beta-Lactoglobulin, BLG)基因5'调控区序列融合,构建α-HNP-1基因的乳腺定位表达载体并对其进行检测.方法:用PCR方法获得α-HNP-1基因片断并克隆于pMD18-T载体,经DNA测序证实α-HNP-1基因序列无误后,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1-HNP-1重组质粒.用PCR方法扩增出BLG基因5'区调控序列并克隆到pcDNA3.1-HNP-1中,构建乳腺定位表达载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1,该载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达.结果:经酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1构建正确,经ELISA检测,大鼠乳汁中有α-HNP-1表达,其48 h表达量为27.67 ng/ml,72h表达量为49.00 ng/ml.结论:成功构建了α-HNP-1基因乳腺定位表达载体并最终在乳腺获得一定量表达,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异表达载体的可行性方法.

关键词：人α-防御素-1、乳腺表达载体、基因克隆、β-乳球蛋白

所属期刊栏目：15

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖北省科技攻关项目2003AA303B06

在线出版日期：2005-09-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：16-18