CaMK-Ⅱ和PP2A在AlCl3致SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化中的调控作用

摘要：

目的 探讨钙调蛋白激酶-Ⅱ(CaMK-Ⅱ)和蛋白磷酸酶-2A(PP2A)在AlCl3致人源性神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞tau蛋白异常磷酸化中的调控作用.方法 选取SH-SY5Y细胞进行AlCl3染毒和CaMK-Ⅱ拮抗剂KN93、PP2A激动剂鞘氨醇干预,实验分为对照组,AlCl3低、中、高染毒组(200、400和800 μmol/LAl3+),KN93干预组(800 μmol/L Al3++0.5 μmol/L KN93)和鞘氨醇干预组(800μmol/L Al3++5 nmol/L鞘氨醇),染毒和干预48 h后,采用CCK-8法测定细胞活力,ELISA方法测定CaMK-Ⅱ、PP2A的含量,Western-Blot检测细胞总tau(tau5)及Thr-181、Thr-231、Ser-262、Ser-396磷酸化水平.结果 细胞活力测定结果显示:与对照组相比,AlCl3中、高染毒组细胞活力降低(P＜0.05);与AlCl3高染毒组相比,KN93干预组和鞘氨醇干预组细胞活力增高(P＜0.05),且鞘氨醇干预组细胞活力与对照组相比差异无统计学意义.ELISA实验结果显示:与对照组相比,AlCl3低、中、高染毒组CaMK-Ⅱ含量增高(P＜0.05),PP2A含量降低(P＜0.05);与AlCl3高染毒组相比,KN93干预组和鞘氨醇干预组CaMK-Ⅱ含量降低(P＜0.05),PP2A含量增高(P＜0.05).Western-Blot结果显示:与对照组相比,AlCl3低、中、高染毒组tau5和Thr-181、Thr-231、Ser-396磷酸化水平增高(P＜0.05),AlCl3高染毒组Ser-262磷酸化水平增高(P＜0.05);与AlCl3高染毒组相比,KN93干预组和鞘氨醇干预组tau5和Thr-181、Thr-231、Ser-262、Ser-396磷酸化水平降低(P＜0.05),且KN93干预组Ser-262磷酸化水平,鞘氨醇干预组Thr-181、Thr-231、Ser-396磷酸化水平与对照组相比差异无统计学意义.结论 AlCl3可引起SH-SY5Y细胞Thr-181、Thr-231、Ser262、Ser-396磷酸化水平异常增高,其机制与CaMK-Ⅱ和PP2A的变化有关;CaMK-Ⅱ主要调控Ser-262磷酸化水平,PP2A主要调控Thr-181、Thr-231、Ser-396磷酸化水平,提示AlCl3致SH-SY5Y细胞tau蛋白异常磷酸化与PP2A密切相关.

关键词：铝、磷酸化tau蛋白、钙调蛋白激酶-Ⅱ、蛋白磷酸酶-2A

所属期刊栏目：49

分类号：O614.31;Q593.2;Q513;R741.02(无机化学)

资助基金：国家自然科学基金No,81472959,81001241

在线出版日期：2020-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：534-539