抗人胱抑素C单克隆抗体制备及免疫检测体系建立

摘要：

目的 获得人胱抑素C(cystatin C,CysC)重组蛋白,制备亲和力高、特异性强的单克隆抗体,建立检测人血清中CysC的竞争ELISA检测体系.方法 根据美国国立生物技术信息中心(NCBI) CysC基因序列优化合成CysC基因片段,并在大肠杆菌中表达得到CysC重组蛋白,免疫Balb/c小鼠后,通过杂交瘤细胞融合技术筛选获得阳性杂交瘤细胞株,制备腹水型单抗并进行纯化,通过间接ELISA法检测抗体的亲和力等性质,建立竞争ELISA检测体系,并对52个血清样本进行检测.结果 获得了4株稳定分泌CysC单克隆抗体的细胞株,将抗体Ab3作为检测抗体并进行辣根过氧化物酶标记,其亲和力为4.26×106 L/mol,检测线性范围为0.011 ～1.924μg/mL,检测限为4.598 ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.145μg/mL.建立的竞争ELISA血清检测体系能准确检测52个血清样本.结论 获得了亲和力、特异性较高的单克隆抗体,建立了可靠的竞争ELISA血清检测体系,为CysC快速免疫检测试剂盒的研制奠定了基础.

关键词：人胱抑素C、单克隆抗体、竞争ELISA

所属期刊栏目：46

分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金J1210026,81673439;江苏省自然科学基金BK20161408

在线出版日期：2018-08-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：628-632