全自动测序仪PCR产物测序影响因素研究
目的 对影响ABI3500xl全自动测序仪测序过程的因素进行研究,以提高测序的准确度和成功率并降低成本.方法 对PCR反应体系、产物纯化方法进行优化.将BigDye分别稀释8、16和32倍进行测序PCR反应,比较不同的BigDye稀释倍数对PCR产物测序结果的影响;使用CENTRI-SEP柱纯化法、BigDye CleaningBeads磁珠法和乙醇乙酸钠EDTA法对测序PCR产物进行纯化,比较不同纯化方法对测序结果的影响.结果 BigDye稀释8倍和16倍时,PCR反应体系的测序结果正常,而稀释32倍时测序结果出现碱基误读;3种不同的测序PCR产物纯化方法均可得到满意的测序结果.相比之下,CENTRI-SEP Kit纯化方法所需时间最短(0.5 h),但是成本较高;乙醇乙酸钠EDTA纯化方法成本最低,但耗时较长(2 h);磁珠纯化法所需时间(1 h)和成本介于CENTRI-SEP Kit法和乙醇乙酸钠EDTA法之间,但不适于高通量操作.结论 ABI3500xl全自动测序仪测序过程中,BigDye稀释16倍时所得测序结果准确且成本较低;3种测序PCR产物纯化方法均可得到准确的测序结果,实际工作中应根据操作者具备的实验条件选择最适纯化方法,以减少测序时间和成本.
全自动测序仪、DNA测序、BigDye、PCR产物纯化
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R155.51(营养卫生、食品卫生)
863计划 No.2012AA101603
2015-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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