豇豆胰蛋白酶抑制剂的非融合表达纯化
目的 探索一种能获得具豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)活性、免疫原性且氨基酸序列与天然蛋白一致的CpTI蛋白表达纯化方法,为评价转CpTI水稻的安全性提供重要材料.方法 将CpTI基因克隆到PET41EK表达载体中,构建该基因的非融合表达载体PET41EK-CpTI,将表达载体转入大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,对诱导表达的时间、温度及IPTG浓度进行优化获得表达产物,对表达产物进行超滤和阴离子交换纯化从而获得纯化蛋白,对获得的纯化蛋白进行免疫原性、活性及N端测序鉴定等,并测定其浓度.结果 在大肠杆菌Rosetta(DE3)、20～25℃、130r/min、0.5mmol/L IPTG、过夜诱导表达条件下,经过30kDa超滤和DAEE FF阴离子交换纯化,可以获得可溶表达量高、具有CpTI免疫原性和活性的纯化蛋白,其纯度达到95％.结论 利用本研究建立的非融合表达方法可以得到在活性、免疫原性、分子量及氨基酸序列等方面与天然CpTI蛋白基本一致的CpTI蛋白,该法简单易行,能够满足大量生产表达的要求.
豇豆胰蛋白酶抑制剂、非融合表达、原核表达
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Q789;Q55;TS201.6(基因工程（遗传工程）)
国家重点基础研究发展计划“973”项目2007CB109207;国家转基因生物新品种培育科技重大专项2008ZX08011-005;2011ZX08011-005
2012-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
374-378,384
