luxAB发光基因标记的铜绿假单胞菌株的构建

摘要：

目的 构建表达luxAB发光基因的铜绿假单胞基因工程菌.方法 用BglⅡ酶切pUC-luxAB质粒,回收luxAB片段与BamH Ⅰ酶切的质粒载体pBBRIMCS-5连接形成重组质粒pBBR-luxAB,再转化E.coli DH5α感受态细胞,经庆大霉素抗性、氯霉素抗性、发光检测多重筛选舍有pBBR-luxAB重组质粒的的阳性克隆,并设立对照菌株.抽提pBBR-luxAB质粒、酶切、凝胶电泳,验证质粒构建的正确性.通过二亲本杂交方式将pBBR-luxAB质粒导入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),构建基因工程菌铜绿假单胞菌(pBBR-luxAB)并对其进行质粒传代稳定性、发光动力学曲线以及发光度和活菌数关系进行测定.结果 成功构建pBBR-luxAB重组质粒并且确定其成功转入铜绿假单胞菌中,连续转接4次后质粒保持率仍可达93%.在加入底物20min后,重组菌发光强度趋于稳定水平(1.32mV/m1),其发光强度与活菌量呈显著正相关(r=0.96,P＜0.05).结论 该研究成功构建luxAB发光基因标记的铜绿假单胞菌(pBBR-luxAB).

关键词：luxAB基因、铜绿假单胞菌、接合转移、二亲本杂交、生物检测

所属期刊栏目：40

分类号：Q78;R117(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金20377018

在线出版日期：2011-04-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：57-60