Taq-Man实时荧光定量PCR同时检测O1和O139群霍乱弧菌
目的 针对霍乱弧菌血清群各自编码O抗原的特异性基因建立能够快速、准确地同时检测O1和O139群霍乱弧茵的荧光PCR检测方法,并克服常用PCR检测方法中经常出现的假阳性现象.方法 分别以rfbM和wbfR基因作为O1和O139群霍乱弧菌的模板设计引物和探针,通过优化反应条件建立了能够同时检测O1群和O139群霍乱弧茵的二联实时荧光定量PCR方法(FQ-PCR).对该方法的特异性、灵敏度进行评估,并对10份模拟食品样品和133份临床样品进行了检测.结果 特异性试验表明,该方法能选择性检测O1和O139群霍乱弧菌,能有效地避免O141群霍乱孤茵和拟态弧茵的假阳性,特异性为100%;灵敏度试验表明,O1群霍乱弧菌和O139群霍乱孤茵检出限分别为92cfu/ml和116cfu/ml;另外,试验建立的检测方法对模拟样品和临床样品检测结果与国标法的检测结果完全一致.符合率为100%.结论 该实时荧光PCR检测方法能够同时检测O1和O139群霍乱弧茵,而且特异性好、灵敏度高,能有效克服假阳性,适用于基层疾病控制、口岸检疫单位日常疫情监测和临床诊断.
霍乱弧菌、实时荧光定量PCR、rfbM基因、wbfR基因、Taq-Man探针
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R155.51(营养卫生、食品卫生)
新世纪优秀人才支持计划NCEF06-0746;粤港招标项目2005A20301002;2007年省部产学研合作专项资金项目2007B090400068;2007B090400113
2010-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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