沙门菌REP-PCR分子分型技术的优化及其在耐药菌株中的应用

摘要：

目的 优化沙门菌REP-PCR分子分型技术,并在沙门菌耐药菌株分型研究中应用,为构建沙门菌同源性追踪体系提供数据.方法 以肠炎沙门菌510041基因组DNA为模板,根据参考文献确定REP引物,PCR扩增其基因组中靶序列.对反应体系模板量、Mg~(2+)浓度和引物浓度的优化,采用对优化项目设置梯度,其它条件不变的方法进行.以优化的REP-PCR法分析24株沙门菌流行耐药株REP-PCR指纹图谱.根据指纹图谱条带对菌株进行分型,并将分型结果与菌株耐药谱分型结果作比较.结果 PCR反应体系DNA模板量100ng/25μl,Mg~(2+)浓度2.0mmol/L,上下游引物浓度各0.4μmol/L时,指纹图谱条带最清晰、明亮;不同血清群和血清型沙门菌株间REP-PCR指纹图谱差异较大,可在0.5kb到2.5kh范围内出现2至6条条带;24株沙门菌流行耐药株用该法可分为15型,根据耐药谱可分为7型.结论 建立了优化的沙门菌REP-PCR分子分型技术:REP-PCR指纹图谱分型比耐药谱分型更加敏感.

关键词：沙门菌、REP-PCR、耐药谱

所属期刊栏目：38

分类号：R181.2;R155.3(流行病学与防疫)

资助基金：四川大学华西公共卫生学院青年科学研究基金

在线出版日期：2010-07-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：736-739