沙门菌基因间共有重复序列-PCR分子分型方法的优化及应用初探

摘要：

目的 优化沙门菌基因间共有重复序列-PCR(ERIC-PCR)分子分型方法,分析沙门菌标准菌株及流行分离株基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱.方法 提取鼠伤寒沙门菌基因组DNA作为模板,根据ERIC核心片段设计引物,运用ERIC-PCR技术扩增沙门菌基因组中的靶序列,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像分析仪对图谱进行观察分析.反应体系中模板量、Mg2+浓度、引物浓度和退火温度的优化实验则采用对优化项目设置梯度、其它条件不变的方法进行.以优化好的ERIC-PCR方法对16株沙门菌及1株大肠杆菌进行分析.结果 在总体积为25μl的反应体系中,选择DNA模板量为lOOng/25μl,Mg2浓度为2.0mmol/L,引物ERIC1R、ERIC2浓度分别为0.4tμmol/L,退火温度为52℃时,扩增产物的电泳图谱条带最清晰完整.不同血清群、型和来源的沙门菌株间基因组DNA ERIC-PCR指纹图谱带型差异较大,可在250～5000bp范围内出现3～13条条带,并在250bp处出现一条特征条带.结论 优化了沙门菌ERIC-PCR的重要反应条件.ERIC-PCR法能区分不同来源的沙门菌,可用于沙门菌病的流行病学调查和同源性追踪,弥补传统分型方法的不足.

关键词：沙门菌、基因问共有重复序列-PCR、流行病学

所属期刊栏目：37

分类号：R181.2(流行病学与防疫)

资助基金：四川大学华西公共卫生学院青年科学研究基金

在线出版日期：2009-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：609-612