RDPCR检测DNA损伤定位于核苷酸水平的研究

摘要：

目的 简化RDPCR建立程序,并在核酸序列水平精确定位DNA损伤. 方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.扩增k-ras基因外显子2(以下称短片段).酶切短片段和基因组DNA构建损伤模型,前者经依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)扩增,每一步产物作凝胶电泳,终产物与单链探针杂交显色,并进行测序;后者以短片段建立的实验条件进行RDPCR扩增,产物与单链探针杂交显色,并进行测序. 结果 凝胶电泳可见酶切短片段在RDPCR中每一步骤的目的 产物条带;酶切短片段和酶切基因组DNA的RDPCR产物均在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤均位于Hinfl在k-ras外显子2上的酶切位点. 结论 短片段建立RDPCR的实验条件简单易行;并首次利用RDPCR检测DNA损伤精确定位于核酸序列水平的碱基位置.

关键词：依赖随机化末端连接物PCR、DNA损伤、定位检测、核苷酸

所属期刊栏目：36

分类号：Q-331;R99;Q783.1;Q524(生物科学的研究方法与技术)

资助基金：国家自然科学基金30070648

在线出版日期：2007-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：159-162