人肿瘤坏死因子相关凋亡配体克隆、表达及纯化

摘要：

目的 应用基因工程技术克隆人肿瘤坏死因子相关凋亡配体分子胞外区(TRAIL)114～281片段的cDNA,构建其原核表达载体,建立原核表达体系.方法 采用RT-PCR方法从外周血单个核细胞的总RNA中扩增TRAIL分子的cDNA,克隆入T载体,阳性克隆经过RT-PCR、酶切和测序鉴定.将阳性克隆中TRAIL再亚克隆至原核表达载体pET28a,构建的表达载体用RT-PCR和酶切来验证,IPTG诱导表达.融合表达蛋白复性后,再用层析纯化表达产物.结果 电泳显示RT-PCR产物约500 bp,与预期值一致.TA克隆RT-PCR和酶切鉴定时的片段大小也为500 bp.阳性克隆测序结果与GeneBank报道一致.构建的原核表达载体经RT-PCR和酶切鉴定后用IPTG诱导后,得到大量的融合表达蛋白,此蛋白是以包涵体形式存在的,对表达的蛋白复性和纯化后,电泳显示得到一条约20 kD的蛋白条带.结论 成功地构建了人肿瘤坏死因子相关凋亡配体分子原核表达载体.

关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡配体、基因克隆、融合蛋白、原核表达

所属期刊栏目：35

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：江苏省六大人才高峰基金2005A3;江苏省博士后科学基金200601025B

在线出版日期：2007-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：697-700