人天然Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定

摘要：

目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法.方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pComb3相应位点,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体库,酶切和PCR鉴定有无插入片段,用白蛋白和IL2作为抗原进行筛选富集.结果部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增.Fab表达库容达约1.2×106,酶切和PCR显示有插入片段.用不同蛋白进行几轮筛选,抗体库得到了不同程度的富集.结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体,用于免疫治疗打下基础.

关键词：噬菌体抗体库、抗体Fab段、抗体工程

所属期刊栏目：35

分类号：R730.51;R392.2(肿瘤学)

资助基金：Tianjin Natural Sci. Found043608411

在线出版日期：2006-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：206-209