串珠镰刀菌伏马菌素产毒株聚合酶链反应检测方法的研究

摘要：

以伏马菌素生物合成所必需的多酮肽合成酶基因fum5为基础,设计了3对特异性引物P1/P2 、P3/P4和Fum5F21/ Fum51,建立了串珠镰刀菌伏马菌素产毒株PCR检测方法.以5株ATCC典型串珠镰刀菌及其他菌株为参考,其中ATCC 52539为伏马菌素B1(FB1)产毒株,测定了PCR方法的特异性.ATCC 52539扩增结果阳性,该3对引物分别扩增出880bp、702bp和1040bp DNA片段,非伏马菌素产毒株ATCC 38946、ATCC 26263、ATCC 12763、 ATCC 38016及其他阴性对照菌株(禾谷镰刀菌、梨孢镰刀菌、木贼镰刀菌、三线镰刀菌、黄曲霉、拟青霉和大肠杆菌O157)结果阴性,证明引物具有很好的特异性.同时以不同稀释度的ATCC 52539 DNA为模板,测定了3对引物PCR的敏感性,P1/P2每PCR反应的检出限为100pg,P3/P4和Fum5F21/ Fum5R1每PCR反应的检出限均为10pg,分别相当于每PCR反应检出104和103个孢子.3对引物PCR检测国内不同地区分离的32株串珠镰刀菌及交孢变种,26株为伏马菌素产毒株,6株为非伏马菌素产毒株.并对部分产毒株PCR(P3/P4)产物,应用内切酶EcoR V和BamHI,进行限制片段长度多态性(RFLP)分析,分别产生181bp、521bp 2个和116bp、258bp、328 bp 3个DNA片段,与文献报道值一致,确证了结果的可靠性.其中1株 ZJ-fm052 FB1产毒基因阳性,但产毒培养检测结果阴性,有待进一步研究.结果表明,PCR为串珠镰刀菌伏马菌素产毒株快速而可靠的检测方法.

关键词：伏马菌素产毒株、多酮肽合成酶基因、聚合酶链反应

所属期刊栏目：32

分类号：R155.31;R155.5(营养卫生、食品卫生)

资助基金：国家自然科学基金39870675

在线出版日期：2003-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：228-232