FAD依赖的葡萄糖脱氢酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达

摘要：

通过体外多拷贝构建实现FAD依赖的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH)在毕赤酵母(Pichia pastoris)X33菌株中的高效表达.将前期构建的经密码子偏好性优化FAD-GDH基因插入到pPICZαA质粒中,通过同尾酶法酶切酶连构建含1～4个表达盒的重组表达质粒,分别电转至毕赤酵母X33中,成功筛选到各种重组菌株.qRT-PCR测定结果表明,载体所含的表达盒数目与嵌合进毕赤酵母基因组中的GDH基因拷贝数之间存在正相关关系.重组菌在试管水平用甲醇诱导72 h,酶活达到最高,其中4拷贝的转化子表达水平最高;选择1拷贝和4拷贝转化子进行10 L发酵罐扩大培养,1拷贝菌株诱导108 h酶活达到最高697.125 U/mL,4拷贝菌株诱导132 h酶活达到最高1 063.279 U/mL,比1拷贝酶活提高52.52％.结果表明通过增加目的基因拷贝数策略有助于提高FAD-GDH的表达量,为其进一步扩大生产提供参考.

关键词：FAD依赖的葡萄糖脱氢酶、多拷贝、重组菌株、高效表达、毕赤酵母

所属期刊栏目：43

分类号：Q935(微生物学)

资助基金：河北省科学院科技计划项目;河北省科学院高层次人才培养与资助项目;河北省科学院高层次人才培养与资助项目

在线出版日期：2023-10-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：18-25