重组人β-catenin原核表达条件的优化及生物学活性鉴定

摘要：

优化重组人β-catenin(138～686 aa)在大肠埃希菌中的原核表达条件,经分离纯化后进行生物学活性鉴定.利用基因工程技术,将构建的重组质粒β-catenin-pET-30a(+)转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后进行β-catenin原核表达.为了提高β-catenin表达量,从诱导时间、诱导温度与IPTG诱导浓度3个单因素方面进行原核表达条件优化.β-catenin经HisTrap层析柱分离纯化后,以荧光偏振实验和酶联免疫吸附测定实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行生物学活性鉴定.构建的工程菌经原核表达条件优化后,确定诱导温度25℃、诱导时间10 h、0.2 mmol/L IPTG作为β-catenin最佳原核表达条件.荧光偏振实验和ELISA实验说明,纯化的β-catenin具有良好的生物学活性.本研究成功进行了重组人β-catenin原核表达条件的优化与生物学活性鉴定,为深入研究β-catenin在肿瘤免疫抵抗中的生物学功能奠定了实验基础.

关键词：β-catenin、表达优化、亲和层析、荧光偏振、酶联免疫吸附测定实验

所属期刊栏目：40

分类号：Q93-331(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目;安徽省自然科学基金项目;安徽省高校自然科学研究重大项目;吉林省科技发展计划项目;皖南医学院博士科研启动基金项目;皖南医学院大学生科研资助金项目

在线出版日期：2020-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：58-66