布鲁菌 bp26基因的原核表达及间接 ELISA方法的临床初步应用

摘要：

构建诊断人布氏菌病的优势抗原BP26原核表达载体，并建立以该蛋白作为包被抗原的间接ELISA方法。人工合成bp26基因片段，构建原核表达载体pET30a-bp26，并转化入大肠埃希菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达，Ni柱亲和纯化BP26重组蛋白，间接ELISA检测其抗原活性，并优化间接ELISA方法的各个参数，检测临床大量样本，对该方法性能进行评价。 PCR鉴定及DNA测序证实pET30a-bp26重组质粒构建成功，并在0．8 mmol／L IPTG 20℃过夜诱导的条件下大量表达，经亲和纯化获得高纯度的可溶性BP26重组蛋白，间接ELISA结果显示该重组蛋白具有抗原活性，优化参数后，该方法的敏感度为70．00％，特异性为94．74％。成功获得高抗原活性的原核表达可溶性BP26重组蛋白，并建立用于临床特异性诊断人类布病的间接ELISA方法。

关键词：BP26重组蛋白、间接ELISA、布鲁菌

分类号：R51;R39

资助基金：科技重大专项“十二五”课题2012ZX10004301-006

在线出版日期：2015-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：43-47