基因工程手段提高磷脂酰丝氨酸合成酶活性的研究

摘要：

为了提高目的蛋白磷脂酰丝氨酸合成酶(PSS)的表达,使用rTaq酶从E.coli K12总DNA中PCR扩增获得磷脂酰丝氨酸合成酶基因片段,将其重组于高效表达载体pET28b质粒,转入相应表达菌株进行表达,收集菌体超声破碎获得含PSS的粗酶液,使用两相反应体系进行生物转化,HPLC-ELSD手段进行酶活检测.结果显示,重组菌株中PSS的酶活力比对照有所提高,同时获得酶活力提高的突变基因pssE210G.将突变基因重组于更高效的表达载体pBAD-MCS,转入相应宿主菌株表达.结果显示E.coli TOP10(pBAD-MCS-pss)表达的酶活性明显优于E.coli BL21(pET28b-pss)中表达的酶活性.以上实验结果表明,将目的基因重组于高效表达质粒有助于提高酶活力;组合到不同的表达质粒,酶活提高程度不同;磷脂酰丝氨酸合成酶基因第73位氨基酸发生突变,对其酶结构和酶活力有直接的影响.

关键词：磷脂酰丝氨酸合成酶、基因重组、同源模建、突变

所属期刊栏目：34

分类号：Q78;Q814;R979.9(基因工程（遗传工程）)

资助基金：辽宁省大学生创新创业训练计划项目201210163024

在线出版日期：2015-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：44-48