融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)在毕赤酵母中的表达及抗肿瘤活性研究

摘要：

构建融合基因蜂毒肽(melittin)与人变构白介素2(M-IL-2(88Arg,125Ala))毕赤酵母分泌型表达载体pPICZα A/M-IL-2(88Arg,125Ala),转化毕赤酵母菌株KM71H,甲醇诱导筛选出的多拷贝阳性菌株表达融合蛋白,纯化融合蛋白,并进行初步的抗肿瘤活性研究.经测序及PCR鉴定,M-IL-2(88Arg,125Ala)正确插入pPICZαA中,电转化后,重组载体通过同源重组整合到酵母基因组中,SDS-PAGE检测在26 ku左右有明显目的条带,与理论相符.经Western blot鉴定具有较高抗原性及特异性.BCA法测定甲醇诱导96 h融合蛋白表达量达315.2 mg/L.CCK-8法检测融合蛋白对人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞生长抑制作用,表明纯化的融合蛋白在体外能抑制人卵巢癌细胞SKOV3细胞及Hela细胞的生长增殖.该研究为融合蛋白M-IL-2(88Arg,125Ala)大规模制备和动物实验以及临床前期研究奠定了基础.

关键词：M-IL-2(88Arg、125Ala)、毕赤酵母、表达、纯化、抗肿瘤活性

所属期刊栏目：34

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：山东省科技攻关项目2007GG3WZ05009;山东省优秀中青年科学家科研奖励基金BS2011SW005

在线出版日期：2014-08-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：47-53