熊蜂生假丝酵母启动子的筛选及强度分析

摘要：

[背景]熊蜂生假丝酵母(Starmerella bombicola)作为一种非常规假丝酵母菌株,因其具备高产槐糖脂生物表面活性剂的能力而受到广泛关注.然而,由于自身的表达系统并不完善,限制了该菌株的代谢工程改造.[目的]克隆、筛选及鉴定新的系列内源启动子表达元件.[方法]通过对比分析熊蜂生假丝酵母全基因组及9种功能已知目的基因信息,并结合启动子预测网站,筛选获得系列启动子候选序列,以SbGFP(密码子优化后的酵母增强型绿色荧光蛋白)为报告基因进行整合表达,通过绿色荧光蛋白强度及转录水平分析鉴定启动子强度.[结果]在分别以葡萄糖和油酸作为唯一碳源的条件下,启动子PTEF1和PGPD在不同碳源培养条件下均显示出较高的转录水平.启动子P CYP52M1、PUGTA1、PUGTB1及PMOB在以油酸为唯一碳源时具有弱转录活性,而在以葡萄糖为唯一碳源时则未检测到它们具有转录活性,推测它们是油酸诱导型启动子.进一步利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对SbGFP进行转录水平分析,检测结果与绿色荧光表达水平一致.[结论]获得了系列熊蜂生假丝酵母内源性启动子,进一步丰富了该菌株的表达元件,为菌株的代谢工程改造及基因的表达与调控奠定了理论基础.

关键词：熊蜂生假丝酵母;启动子;密码子优化;绿色荧光蛋白;基因表达与调控

所属期刊栏目：48

资助基金：江苏省自然科学基金BK20171138

在线出版日期：2021-12-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：3569-3579