有机磷降解酶在重组大肠杆菌中的表达及一步纯化固定化

摘要：

[背景]有机磷化合物作为一类广谱杀虫剂,因其用量大、毒性强且不易降解,在自然界中的残留已对环境造成了严重污染.[目的]有机磷降解酶(organophosphohydrolase,OpdA)可降解多种有机磷化合物,探究其被固定到NiCo2O4载体上后用于有机磷化合物的降解效果.[方法]构建含组氨酸标签(histidine tag,His-tag)的OpdA,以pET-28a(+)为载体,Escherichia coli Rosetta(DE3)为宿主细胞,在终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导下表达His-tagged OpdA.采用一步纯化固定化方法,实现固定化酶(OpdA@NiCo2O4)的制备.[结果]采用水热处理和煅烧制备了含过渡金属离子的NiCo2O4,利用过渡金属离子对酶分子表面组氨酸咪唑基的配位作用,实现了发酵粗酶液中His-tagged OpdA的一步纯化固定化,在优化条件下获得了高稳定性的OpdA@NiCo2Oa;然后将其用于有机磷化合物的降解,在NaBH4存在条件下,通过级联反应和降解条件优化,实现了有机磷化合物的高效降解.[结论]该研究不但实现了重组酶的一步分离纯化和固定化,也为有机磷化合物的降解提供了一条安全、高效、环保的新途径.

关键词：有机磷降解酶、重组表达、组氨酸标签、一步纯化固定化、有机磷化合物

所属期刊栏目：47

资助基金：国家自然科学基金;河北省自然科学基金;河北省高校百名优秀创新人才项目;河北省高层次人才保障计划

在线出版日期：2020-08-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：2094-2105