滑液支原体NADH氧化酶的酶学活性及亚细胞定位研究

摘要：

[背景]许多研究表明,支原体的NADH氧化酶(NADH oxidase,NOX)不仅在胞浆中发挥生物酶学功能,也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能.[目的]对滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究,分析其在MS致病过程中的潜在作用.[方法]对MS的NOX蛋白进行原核表达、纯化,然后对重组MSNOX (rMSNOX)的酶学活性及影响酶活的条件进行研究,测定其酶比活力、米氏常数及最大反应速率,接着用MS阳性血清及制备的rMSNOX兔多克隆抗体,分别与rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞浆蛋白进行Western blotting 反应,鉴定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情况.[结果]在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达rMSNOX蛋白,相对分子质量约为53kD,并获得纯化的rMSNOX蛋白;酶活测定显示rMSNOX蛋白的酶比活力为14.17 IU/mg,最适酶促温度为37℃,最适pH为7.5,双倒数法求得rMSNOX的最大反应速率Vmax为21.8 μmol/(L·min),米氏常数Km(NADH)为244.0 μmol/L;rMSNOX蛋白与MS阳性血清特异性结合,证明具有良好的免疫原性;亚细胞定位研究表明NOX蛋白主要存在于MS的胞浆中,细胞膜上有少量的分布.[结论]首次证实MS的NOX不仅具有NADH氧化酶活性,也是MS具有免疫原性的膜蛋白,为进一步探索NOX在MS致病过程中的作用提供了分子基础.

关键词：滑液支原体、NADH氧化酶、酶学活性、免疫原性、亚细胞定位

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资助基金：国家重点研发项目;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金

在线出版日期：2020-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：801-812