三种猕猴桃根腐病致病菌多重实时定量PCR检测技术的建立及应用

摘要：

[背景]近年来,随着猕猴桃种植面积的不断扩大,病害的频繁发生已逐渐影响猕猴桃的产量和品质.恶疫霉(Phytophthora cactorum)、樟疫霉(P.cinnamomi)和雪松疫霉(P.lateralis)是一类可以引起猕猴桃根腐病的致病疫霉菌.[目的]建立并优化可以同时检测3种致病疫霉的多重实时定量检测技术,并调查猕猴桃主要产区的致病菌分布情况.[方法]基于Ypt1 (ras-related protein gene)基因设计恶疫霉、樟疫霉和雪松疫霉的特异性TaqMan探针和引物,建立并优化多重实时荧光定量PCR检测体系.利用近缘种检验检测体系特异性并进行灵敏度测试,应用该检测体系分析猕猴桃主要产区根际土壤中3种致病疫霉的Ypt1基因含量.[结果]供测试的11个恶疫霉近缘种、11个樟疫霉近缘种、13个雪松疫霉近缘种及非目标菌种DNA样品中均无荧光信号,反应结果为阴性,而在恶疫霉、樟疫霉和雪松疫霉DNA样品中分别检测出HEX、FAM和ROX荧光信号,反应结果为阳性.三种疫霉的检测灵敏度均达到100fg.此外,通过对猕猴桃主产区陕西省周至县和眉县果园共166份土壤样品的检测发现,恶疫霉的分布最广泛且Ypt1基因含量最高,樟疫霉和雪松疫霉则相对较少.[结论]建立的猕猴桃根腐病致病疫霉多重实时定量检测体系特异性强、灵敏度高,适合于恶疫霉、樟疫霉和雪松疫霉的检测及定量分析.该技术可为猕猴桃疫霉病害的早期诊断、监测及预防提供指导.

关键词：猕猴桃、恶疫霉、樟疫霉、雪松疫霉、Ypt1基因、多重实时定量PCR

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资助基金：陕西省自然科学基础研究计划2019JM-491;中央高校基本科研业务费专项资金GK201703033,GK201603110

在线出版日期：2020-04-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：311-321