甲硫氨酸γ-裂解酶基因在大肠杆菌中的高效表达和活性

摘要：

[背景]为了开发海洋蕴藏的新型微生物资源,本研究团队采用不依赖培养的宏基因组技术,构建了深海宏基因组文库,并对其中的重要基因进行后续研究.[目的]使用来自深海宏基因组文库中的甲硫氨酸γ-裂解酶基因(mgl)在大肠杆菌中高效表达并对其活性进行检测.[方法]将 mgl基因克隆到表达载体 pET-28a(+)并转化大肠杆菌 BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,并对表达条件进行优化,获得甲硫氨酸γ-裂解酶(Methionine-lyase,rMGL)的大量表达.亲和层析纯化重组蛋白后对酶的活性进行研究.[结果]亲和纯化后获得大量表达蛋白 rMGL,大小与预测的 46kD相符合,并具有很高的裂解 L-甲硫氨酸的活性.rMGL能催化L-甲硫氨酸和DL-同型半胱氨酸的裂解,但几乎不作用于L-半胱氨酸和 L-胱氨酸,其中对 DL-同型半胱氨酸的催化效率比对L-甲硫氨酸的催化效率高,相对活性约为对 L-甲硫氨酸催化效率的1.4倍.[结论]来自深海宏基因组文库中的 mgl基因能够利用 pET-28a(+)/BL21(DE3)高效表达rMGL.

关键词：宏基因组文库、Idiomarina、甲硫氨酸γ-裂解酶、诱导表达、重组蛋白纯化

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资助基金：广州市科技计划科学研究专项201607010326

在线出版日期：2020-03-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：3225-3232