与猪流行性腹泻病毒M蛋白互作的宿主蛋白的鉴定

摘要：

[背景]猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚.[目的]利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDV M蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础.[方法]将MOI=0.1的PEDV DR 13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36h后,收集细胞并进行裂解.利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析.[结果]基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP (Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证买CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用.[结论]鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据.

关键词：免疫共沉淀、猪流行性腹泻病毒、CDC42、eIF3L、膜蛋白、蛋白互作

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资助基金：国家自然科学基金31602060;上海市农业科学院学科领域建设专项31602060-2016匹配;国家重点研发计划2016YFD0500101;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2015第6-1-9号

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1434-1442