中国香菇种质资源中主要真菌病毒的多重RT-PCR检测技术

摘要：

[背景]病毒是食用菌生产上较重要的一类潜在隐患.我们在前期的研究中发现,中国香菇(Lentinula edodes)种质资源中最常见的病毒有2种,分别为L.edodes partitivirus 1 (LePV1)和L.edodes mycovirus HKB (LeV-HKB)病毒,这2种病毒能单一或复合感染香菇.[目的]建立香菇种质主要病毒的快速检测技术,提高香菇病毒检测效率,降低检测成本.[方法]依据香菇β-actin基因及病毒LePV1和LeV-HKB编码依赖RNA的RNA复制酶(RdRp)基因序列分别设计引物,以复合感染了这2种香菇病毒的菌丝体为材料,对影响RT-PCR反应的主要因素模板浓度、引物浓度、dNTPs浓度、退火温度和循环次数等进行优化筛选,建立同时检测LeV-HKB病毒(LeV-HKB相关病毒)和LePV1病毒的多重RT-PCR检测技术.[结果]模板浓度、退火温度和循环次数对多重RT-PCR检测结果均有较大影响,而引物浓度和dNTPs浓度对检测结果的影响较小.所建立的多重RT-PCR技术在香菇核心种质病毒检测中表现为扩增目标条带清晰分明,检测结果与单重RT-PCR检测结果一致.对两种病毒的多重RT-PCR产物进行了序列测序,结果表明扩增片段序列与目标基因序列相似性在99％以上.[结论]所建立的多重RT-PCR检测体系具有较好的特异性与适用性,为室内和田间香菇病毒早期检测、病害流行的监测提供了技术储备.

关键词：香菇、食用菌、真菌病毒、检测

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资助基金：国家现代农业产业技术体系“食用菌病害无害化轻简化防控”岗位科学家专项CARS-20;农业部华中作物有害生物综合治理重点实验室/农作物重大病虫草害防控湖北省重点实验室开放基金2015ZTSJJ11

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1381-1389