N-糖基化对一种新型重组耐高温β-甘露聚糖酶(ReTMan26)稳定性的影响

摘要：

[背景]对来源于嗜热枯草芽孢杆菌(TBS2)的一种新型重组耐高温β-甘露聚糖酶(ReTMan26)基因序列进行分析,该基因中含有3个N-糖基化位点(N8、N26与N255),经毕赤酵母表达时可进行N-糖基化修饰.[目的]确定N-糖基化对ReTMan26稳定性的影响.[方法]通过构建ReTMan26蛋白质三维结构模型,初步分析N-糖基化对该酶稳定性的影响.在此基础上,利用天然蛋白去糖基化试剂盒除去ReTMan26的N-多糖链,获得去除N-糖基化的耐高温β-甘露聚糖酶(ReTMan26-DG),并对纯化后的ReTMan26及ReTMan26-DG进行相应的稳定性对比检测.[结果]ReTMan26与ReTMan26-DG的最适反应pH均为6.0,但在pH l.5-9.0范围内,ReTMan26的稳定性比ReTMan26-DG有小幅提高.ReTMan26的最适反应温度为60℃,比ReTMan26-DG高5℃;ReTMan26经100℃处理10 min,剩余酶活为58.6％,而ReTMan26-DG经93℃处理10 min,剩余酶活为58.2％,100℃处理10 min则完全失活.经胃蛋白酶及胰蛋白酶在37℃处理2h后,ReTMan26的剩余酶活分别为70.5％及91.2％,比ReTMan26-DG分别提高了23.7％及 25.6％.[结论]N-糖基化可提高ReTMan26的pH稳定性、耐热稳定性及抗蛋白酶消化性能.

关键词：N-糖基化、重组耐高温β-甘露聚糖酶、纯化、稳定性

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资助基金：国家轻工技术与工程一流学科课题资助项目LITE2018-11

在线出版日期：2019-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：11-19