ORF3蛋白促进猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上的增殖

摘要：

[背景]猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪而引起的一种急性肠道传染病,常导致病猪水样腹泻、呕吐、脱水.自2010年起,其大规模的暴发给养猪业造成巨大的经济损失.由于对PEDV免疫机理及侵入机制知之甚少,至今仍缺乏有效的PED防治措施.[目的]研究orf3对PEDV体外增殖的影响.[方法]利用基于RNA同源重组的PEDV反向遗传学操作技术拯救一系列携带不同orf3基因及orf3基因缺失的重组PEDV;将获得的重组PEDV以MOI 0.1感染Vero细胞,分别于感染的第8、16、24、32、40、48 h测定其TCID50并绘制病毒生长曲线;分别在感染25 h和36 h利用全自动细胞计数分析仪对6孔板内的细胞进行计数,并于感染后的第12、24、36、48 h用CCK-8试剂盒对其细胞活力进行测定.[结果]RT-PCR结果及细胞病变观察证明成功拯救到了携带不同orf3基因或orf3基因缺失的重组PEDV;进一步的免疫组化分析结果证实PEDV的ORF3蛋白可以在Vero细胞中合成.SPSS软件分析表明携带orf3基因的重组PEDV的滴度(TCID50)显著高于缺失orf3基因的重组PEDV的滴度;带有orf3基因的重组PEDV感染Vero细胞25 h和36h时的活细胞数显著高于缺失orf3基因的重组病毒感染相同时间时的活细胞数;而且重组PEDV感染Vero细胞24 h后,带有orf3基因的重组PEDV的细胞活性显著高于缺失orf3基因的重组病毒.[结论]ORF3蛋白对于PEDV在Vero细胞中的增殖具有促进作用,该作用是通过延缓或减少感染细胞的死亡实现的.本研究为揭示PEDV orf3基因的功能和PEDV复制机制的研究提供理论基础.

关键词：orf3、猪流行性腹泻病毒、体外增殖

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资助基金：国家自然科学基金31572519,31402219;科技部国际合作专项2013DFG32370;国家重点研发计划2016YFD0500101;上海市科技兴农重点攻关项目沪农科攻字2015第6-1-9号

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1508-1517