10.13344/j.microbiol.china.170429
菜豆环氧化物水解酶的表达及其催化特性研究
[背景]光学纯环氧化物及邻二醇是一类多功能手性砌块.与化学合成法相比,环氧化物水解酶(EHs)介导的生物转化法因环境友好而成为当前的研究热点.[目的]从菜豆(Phaseolus vulgaris)中克隆一种EH基因并进行原核表达,研究重组酶催化环氧苯乙烷(Styrene oxide, SO)的水解特性.[方法]通过计算机辅助分析EHs的一级结构,推测一种菜豆来源的未知功能蛋白(PvEH4)可能具有EH活性.利用RT-PCR技术,以菜豆总RNA为模板,扩增编码PvEH4的基因pveh4,并实现其在Escherichia coli BL21(DE3)中的表达.利用重组菌E. colilpveh4全细胞催化SO水解,分析PvEH4的对映选择性和区域选择性.[结果]一级结构分析表明,PvEH4具有α/β折叠型EH特有的保守区域.SDS-PAGE结果显示PvEH4的表观分子量为39.4kD.PvEH4针对SO的对映选择率(E值)为10.1,区域选择性系数αs和(B)R分别为99.5％和82.5％.当外消旋SO转化率达到68.1％时,可同时获得99.9％ 和92.3％ eep的(R)-苯乙二醇(Phenyl-l,2-ethanediol,PED),两者的产率分别为31.9％和65.6％.[结论]PvEH4的挖掘不仅增加了植物类Ehs的数量,同时也为Ehs的蛋白分子改造提供参考.
菜豆、环氧化物水解酶、对映选择性、区域选择性、不对称水解
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国家自然科学基金21676117;江苏省普通高校研究生科研创新计划项目SJZZ16_0217,KYLX16_0804;National Natural Science Foundation of China21676117;Graduate Student Research and Innovation Program of Jiangsu ProvinceSJZZ16_0217, KYLX16_0804
2018-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
797-804
