积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合

摘要：

[背景]积磷小月菌(Microlunatus phosphovorus)是重要的聚磷微生物,在好氧条件下积累聚磷酸盐并在厌氧条件分解聚磷酸盐,这个过程可能受到精细的基因调控.[目的]利用凝胶迁移实验(EMSA)分析调控蛋白Mlp21700结合的多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子,找到Mlp21700可能的调控靶点.[方法]以积磷小月菌JN459菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增Mlp21700编码序列,构建重组质粒pET28a-21700并转化到大肠杆菌Transetta(DE3)菌株,诱导表达后采用非变性方法纯化获得Mlp21700融合蛋白.利用PCR方法分别扩增各个Poly-P代谢基因的启动子,用生物素标记后作为探针.采用EMSA分析Mlp21700在试验条件下是否结合启动子以及结合强度.[结果]DNA测序和酶切验证表明pET28a-21700携带正确的Mlp21700编码序列.SDS-PAGE分析显示试验条件下Transetta(DE3)菌株大量表达可溶性Mlp21700,纯化的重组Mlp21700蛋白纯度大于90％,含量为0.64 mg/mL.EMSA分析表明在试验条件下Mlp21700能够结合Mlp26610基因ppgk和Mlp44770基因ppx的启动子.[结论]调控蛋白Mlp21700可能参与Mlp26610和Mlp44770基因的转录调控,进而调控Poly-P的分解过程.

关键词：积磷小月菌、多聚磷酸盐、调控蛋白、启动子、凝胶迁移实验

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资助基金：国家自然科学基金31500094；山东省自然科学基金ZR2015EM018；山东省医学科学院医药卫生科技创新工程项目201604;National Natural Science Foundation of China31500094;Natural Science Foundation of Shandong ProvinceZR2015EM018;Innovation Project of Shandong Academy of Medical Sciences201604

在线出版日期：2018-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：780-787