10.13344/j.microbiol.china.170502
非洲猪瘟病毒微滴数字PCR (ddPCR)方法的建立及应用
[目的]非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失.因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国.本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR (Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法.[方法]针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR (qPCR)和ddPCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFVELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率. [结果]建立的ASFV qPCR和ddPCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),ddPCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20 μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是qPCR的10倍.ASFV ddPCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应.[结论]该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进ddPCR技术在我国的发展和应用.
微滴数字PCR、实时荧光定量PCR、非洲猪瘟病毒、诊断调查
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S85;R44
Key Technologies R&D Program of China No.2013BAD12B04国家科技支撑计划项目2013BAD12B04
2018-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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