布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测方法的建立

摘要：

[目的]布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病,是由布鲁氏菌引起的以感染家畜为主的人畜共患传染病,造成严重的公共卫生问题.目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免疫相结合,所以建立快速准确的诊断方法对防治和清除布病非常必要.本文建立布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)抗体检测方法,为布鲁氏菌病(布病)的快速高效诊断提供技术手段.[方法]提纯猪种布鲁氏菌S2株脂多糖O链(OPS),经异硫氰酸荧光素(FITC)标记后作为诊断抗原.通过对样品稀释液、抗原稀释度、反应时间等条件的优化,初步建立了布鲁氏菌荧光偏振诊断方法.用该方法对148份布病阳性血清(其中牛血清70份,羊血清78份)和155份布病阴性血清(其中牛血清82份,羊血清73份)进行检测,确定其敏感性和特异性.按确定的技术参数,制备3批布鲁氏菌FPA抗体检测试剂盒,使用质控阴、阳性血清分别评价试剂盒的批内和批间重复性.用400份临床样本比较本研究开发试剂盒与商品化进口FPA试剂盒的符合率.[结果]使用0.5％蔗糖磷酸缓冲液作为血清样品稀释液;标记抗原的使用浓度为90 μg/mL;最佳反应时间为3-5 min.本检测方法的判定标准为:δmP值＜20时为阴性,δmP值≥20时为阳性.按上述条件建立的FPA检测148份布病阳性血清和155份布病阴性血清,结果敏感性为98.6％,特异性为98.7％.对400份临床样本的比对检测显示,研究建立的FPA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为94.0％.[结论]研究建立的布鲁氏菌PFA抗体检测方法具有良好的特异性和敏感性,可作为一种重要的布病诊断快速诊断方法.

关键词：布鲁氏菌、荧光偏振诊断方法、特异性、敏感性

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分类号：S85;R51

资助基金：National Key Research and Development Program of China No.2016YFD0500902国家重点研发计划项目2016YFD0500902

在线出版日期：2018-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2822-2829