10.13344/j.microbiol.china.170335
应用跨膜区置换的血凝素蛋白建立H7N9禽流感病毒抗体间接ELISA检测方法
[目的]由于H7N9禽流感病毒能够感染鸡,并且已经变异成了高致病性毒株,因此,鸡群中H7N9禽流感疫苗的免疫是一个趋势,而鸡群免疫后抗体检测方法的建立也十分必要.本研究旨在建立一种灵敏、高效、高通量的鸡群H7N9亚型禽流感病毒抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法.[方法]通过昆虫杆状病毒表达系统分别表达属于W1、W2-A和W2-B分支H7N9流感病毒的3种野生型血凝素(HA)蛋白,以及跨膜区(TM)置换为H3 HA TM的W2-B分支HA蛋白(H7-53TM).4种HA蛋白经过离子交换层析纯化后作为抗原,通过ELISA检测H7N9禽流感病毒抗体.[结果]ELISA特异性、敏感性和重复性试验结果显示,跨膜区置换主要影响HA蛋白ELISA检测的重复性,以H7-53TM为抗原的ELISA方法具有较好的重复性,其批内和批间变异系数小于10％,然而3种野生型HA蛋白与部分血清反应批内和批间变异系数大于10％,重复性较差,因此选择H7-53TM蛋白作为ELISA包被抗原.通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,以H7-53TM为抗原的ELISA能够精准地区分H7N9亚型流感病毒抗体阳性和阴性血清.通过相关性分析,该ELISA方法与134份鸡血清HI试验结果具有显著强相关性(r=0.854 6,P＜0.000 1),并且与3个分支疫苗株免疫血清的HI试验结果也具有显著相关性(r＞0.5,P＜0.05).[结论]跨膜区置换能够提高HA蛋白抗原检测H7N9禽流感病毒抗体的重复性,并应用跨膜区置换的HA蛋白建立了一种能够检测不同分支疫苗株免疫的H7N9亚型禽流感病毒抗体间接ELISA检测方法.
流感病毒、H7N9亚型、间接ELISA、血凝素蛋白、跨膜区
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R73;S85
Guangzhou Science and Technology Plan201504010025;H7N9 Avian Influenza Joint Research of Guangdong Province No.[2014]380广州市科技计划项目201504010025;广东省农业厅H7N9流感联合攻关项目粤财农[2014]380号
2018-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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