大肠杆菌MetD运输系统缺失对蛋氨酸积累的影响

摘要：

[目的]构建MetD运输系统缺失突变株,研究该运输系统功能缺失对Escherichia coliW3110蛋氨酸吸收和积累的影响.[方法]通过RT-qPCR比较MetJ阻遏调控解除菌株和野生株E.coli metNIQ表达量的变化,并分析蛋氨酸吸收速度的变化;利用Red同源重组系统分别敲除metNIQ基因簇、metN、metI和metQ,构建MetD运输功能缺失的突变株,研究蛋氨酸吸收速度的变化及对蛋氨酸积累的影响.[结果]MetJ阻遏调控解除后,metNIQ的表达量和蛋氨酸吸收速度显著增加.通过敲除E.coli W3110和Me05的metNIQ,MetD运输系统缺失导致蛋氨酸吸收速度下降.另外,分别敲除用于产蛋氨酸基座菌株Me06的metNIQ基因簇、metN、metI和metQ.生长曲线和摇瓶发酵结果表明,metI的敲除促进菌体的生长和蛋氨酸的合成,蛋氨酸的产量从0.39 g/L提高到0.45 g/L,提高了15.4％,蛋氨酸产率从0.14 g/g DCW提高到0.15 g/gDCW.[结论]E.coli MetD功能的缺失能够降低蛋氨酸的吸收速度,敲除metNIQ基因簇上的metI能够提高蛋氨酸产量.

关键词：大肠杆菌、MetJ阻遏蛋白、MetD运输系统、L-蛋氨酸、基因敲除

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分类号：X7 ;TS2

资助基金：National Natural Science Foundation of China31401674;National High-Tech Research and Development Program of China 863 Program2012AA02120101;Jiangnan University Independent Key Project No.JUSRP51503国家自然科学基金项目31401674;国家高技术研究发展计划项目863计划2012AA02120101;江南大学自主重点项目JUSRP51503

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1416-1426