鸭疫里默氏杆菌Mtan对底物SAH的催化活性

摘要：

[目的]分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)不同血清型pfs基因的序列差异,并开展其编码蛋白S-腺苷高半胱氨酸核苷酶(Mtan,又称Pfs)的催化活性研究.[方法]PCR扩增9株不同血清型RA的pfs基因,分析其核苷酸序列的同源性;构建该基因的重组表达载体pCold-RA-pfs,表达、纯化RA的重组蛋白Mtan(RA-Mtan);测定RA-Mtan对底物S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine,SAH)的催化活性,运用哈维弧菌报告菌株BB170检测催化底物的自诱导物2 (Autoinducer-2,AI-2)活性.[结果]对RA的pfs序列分析结果表明,不同血清型RA的核苷酸一致性在93.9％-100％之间;SDS-PAGE检测结果表明,RA-Mtan呈可溶性表达;酶活测定表明RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌(Avain pathogenic Escherichia coli,APEC)的LuxS蛋白共同作用于底物时,可产生浓度为176.7 μmol/L的同型半胱氨酸(Homocysteine,HCY);AI-2活性检测结果表明,产生的AI-2具有生物学活性.[结论]RA不同血清型的pfs高度保守,RA pfs基因的编码产物RA-Mtan在体外具有催化SAH的活性,RA-Mtan和禽致病性大肠杆菌的LuxS 蛋白共同作用于底物SAH时,能产生有活性的AI-2,为进一步研究pfs对RA的调控作用提供参考.

关键词：鸭疫里默氏杆菌、S-腺苷高半胱氨酸核苷酶、S-腺苷同型半胱氨酸、密度感应系统、自诱导物质AI-2

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分类号：S85;S83

资助基金：National Natural Science Foundation of China31572546,31370045;Shanghai Agriculture Applied Technology Development Program No.G20150109国家自然科学基金项目31572546,31370045;上海市科技兴农重点攻关项目G20150109

在线出版日期：2017-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1165-1170