DOI:10.13344/j.microbiol.china.160518褐藻胶裂解酶基因的克隆表达及重组酶酶学性质引用分享分享到微信朋友圈打开微信,点击底部的“发现”,使用 “扫一扫” 即可将网页分享到我的朋友圈收藏摘要:[目的]克隆交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.) BYS-2的褐藻胶裂解酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源表达,对分离纯化的重组酶进行酶学性质研究.[方法]以交替假单胞菌BYS-2菌株基因组DNA为模板,克隆得到褐藻胶裂解酶基因alg738,构建重组基因工程菌BL21 (DE3)/pET22b-alg 738,诱导表达,表达产物通过Ni-NTA树脂纯化后进行酶学性质研究.[结果]重组酶的最适反应pH为8.0,在pH 6.0-9.0范围内37℃保温lh仍能保持84%以上的相对酶活力,具有较好的pH稳定性;最适反应温度为45℃,热稳定性实验显示在37℃下保温60 min其残余酶活力仍达66.6%;在5 mmol/L浓度下,Na+、Mg2+、Mn2+对该酶具有明显的促进作用,Ni2+、C02+、Cu2+、Hg2+、Zn2+、EDTA、β-巯基乙醇、SDS具有明显的抑制作用.动力学参数Km、Vmax分别为1.11 g/L和0.011 g/(L.min),底物特异性分析表明该重组酶为偏好聚甘露糖醛酸钠(Poly M)裂解作用的双功能酶.[结论]重组褐藻胶裂解酶具有良好的酶学特性,为褐藻胶裂解酶的开发应用打下基础.关键词:褐藻胶裂解酶、交替假单胞菌、克隆表达、重组酶、酶学性质所属期刊栏目:44分类号:S98;S43资助基金:State Oceanic Administration of Marine Public Welfare Industry Research201305015;Enterprise Technology Innovation Project of Fujian Province;Fuzhou Science and Technology Project No.2016X0005国家海洋局海洋公益性行业科研专项项目201305015;福建省企业技术创新项目;福州市科技计划项目2016X0005在线出版日期:2017-07-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)页数:共7页页码:1074-1080 英文信息展示收起英文信息