黑曲霉阿魏酸酯酶在毕赤酵母中的组成型表达

摘要：

[目的]实现黑曲霉来源的阿魏酸酯酶在毕赤酵母(Pichia pastoris GS 115)中的组成型表达.[方法]以黑曲霉(Aspergillus niger)基因组为模板,经重叠延伸PCR扩增得到阿魏酸酯酶基因(AnfaeA),将其与载体pGAP9K相连,构建重组表达载体pGAP9KAnfaeA,经Sal线性化后电转入毕赤酵母GSll5中,得到重组菌株.高效液相色谱法测定发酵液中阿魏酸酯酶活力,并对重组菌进行了发酵优化.[结果]克隆得到783 bp的阿魏酸酯酶编码基因并实现了其在毕赤酵母中的组成型表达.重组菌发酵84 h后,上清液中酶活达5.72±0.10 U/mL.重组酶(reAnfaeA)经分离纯化后比酶活为59.75 U/mg,大小约为40 kD.发酵优化结果为:葡萄糖40.0 g/L,蛋白胨10.0 g/L,酵母膏30.0 g/L,CaCO3 0.2 g/L,种龄28 h,接种量3％(体积比),装液量50 mL/250 mL.在此条件下发酵培养,酶活达15.60±0.23 U/mL.[结论]阿魏酸酯酶在毕赤酵母中的组成型表达,对研究毕赤酵母组成型表达系统和阿魏酸酯酶的发酵生产具有一定的借鉴意义.

关键词：黑曲霉、阿魏酸酯酶、GAP启动子、组成型表达、发酵优化

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资助基金：National High-Tech Research and Development Program of China 863 Program No.2011AA100905国家高技术研究发展计划项目863计划No.2011AA100905

在线出版日期：2017-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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