10.13344/j.microbiol.china.160005
腺苷酸脱氨酶在乳酸克鲁维酵母中构建表达
[目的]实现鼠灰链霉菌来源经密码子优化后的腺苷酸脱氨酶基因在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis GG799)中组成型表达.[方法]以鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)来源的腺苷酸脱氨酶(AMP)基因经密码子优化后作为模板,设计特异性引物,PCR扩增AMP脱氨酶基因opt-AMPD,以pKLAC1为载体构建重组表达质粒pKLAC1-opt-AMPD,经Sac Ⅱ线性化后电转化法转入K.lactis GG799,筛选得到重组菌株,测定酶活,经His TrapTM HP纯化后得到AMP脱氨酶,并优化重组菌的发酵培养基.[结果]对AMP脱氨酶基因进行了密码子优化后,构建了重组K.lactis GG799/pKLAC1-opt-AMPD,实现组成型表达,密码子优化后AMP脱氨酶酶活提高到586±50 U/mL.SDS-PAGE结果显示,纯化后的AMP脱氨酶为单一条带,蛋白大小约为60 kD.优化的发酵培养基为(g/L):葡萄糖40、蛋白胨20、酵母粉15、NaC1 8、KC1 10、MgSO4 2,30℃、200 r/min发酵120 h,酶活达到2 100±60 U/mL.[结论]实现了密码子优化后的腺苷酸脱氨酶基因在乳酸克鲁维酵母GG799内的组成型表达,为实现腺苷酸脱氨酶的重组高效表达和发酵生产进行了有益探索.
乳酸克鲁维酵母、腺苷酸脱氨酶、重组表达、发酵优化
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国家高技术研究发展计划项目863计划No.2011AA100905National High-Tech Research and Development Program of China 863 Program No.2011AA100905
2016-12-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
2341-2352