产顺式-4-L-羟脯氨酸工程菌的构建及转化条件的优化

摘要：

[目的]构建产顺式-4-L-羟脯氨酸(cis-4-Hyp)的工程菌并优化其转化条件.[方法]通过调整大肠杆菌的密码子偏好性以及mRNA二级结构对顺式-4-L-脯氨酸羟化酶(cis-P4H)基因进行优化,构建该基因的表达菌株.采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化cis-P4H,测定cis-P4H的酶活和稳定性.然后采用全细胞催化法制备cis-4-Hyp,通过单因素试验和正交试验对相关的转化条件进行优化.[结果]构建了一株产cis-4-Hyp的工程菌,cis-P4H的比活为2.65 U/mg,半衰期为2.32 h.经过条件优化后,采用OD600为0.9时加入IPTG获得的工程菌菌体构建转化体系,在转化体系pH 6.5,转化温度为31℃,转化时间为60 h时,L-脯氨酸转化率最高达到83.33％.[结论]研究获得的工程菌及转化条件具有良好的工业应用前景.

关键词：L-脯氨酸、顺式-4-L-羟脯氨酸、转化条件、转化率

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资助基金：河北省教育厅自然科学研究项目No.QN20131028;药物化学生物学国家重点实验室开放基金项目No.20130270;河北师范大学科学研究基金项目博士科研启动基金项目No.L2012B10,The Research Foundation of the Education Bureau of Hebei Province No.QN20131028;The Open Fund of the State Key Laboratory of Medicinal Chemical Biology No.20130270;The Doctoral Startup Foundation of Hebei Normal University of Science and Technology No.L2012B10

在线出版日期：2016-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1887-1894