鼠李糖乳杆菌菌毛SpaA亚基的表达、抗体制备及其种属特异性研究

摘要：

[目的]制备鼠李糖乳杆菌菌毛亚基SpaA多克隆抗体,研究其种属特异性.[方法]应用PCR方法从鼠李糖乳杆菌GG的基因组扩增出spaA,并连接到质粒pET-28a(+)中.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和镍柱纯化制备重组SpaA.通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,利用全菌ELISA、Western和Dot-blot分析了SpaA在18株乳酸菌(12个种)中的分布特征.[结果]表达的重组SpaA分子量为36kD,与预期大小一致;获得的SpaA抗体效价为1∶12 800. Western结果显示抗体与天然SpaA具有良好的反应性.在测定的18株乳酸菌中,鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌3个种属菌株的spaA基因PCR和RT-PCR检测均为阳性.但全菌ELISA和Dot-blot结果显示,只有3株鼠李糖乳杆菌的全菌细胞与SpaA抗体呈特异性反应,而其它种属的菌株没有明显的交叉反应.[结论]尽管spaA基因在鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌中具有高度同源性,但SpaA蛋白只特异性地呈现在鼠李糖乳杆菌细胞表面.本研究中获得的SpaA抗体,为高黏附性鼠李糖乳杆菌的免疫磁珠分离及菌毛功能研究提供了工具.

关键词：鼠李糖乳杆菌GG、菌毛、SpaA亚基、表达、抗体

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资助基金：National Natural Science Foundation of China No.31371806;College Natural Science Foundation of Jiangsu Province No.15KJA550004国家自然科学基金项目No.31371806;江苏省高校自然科学基金项目No.15KJA550004

在线出版日期：2016-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1288-1294