破囊壶菌脂肪酶基因的克隆、双温控自诱导表达及酶学性质研究

摘要：

[目的]克隆破囊壶菌Aurantiochytrium sp.PKU#SW7的脂肪酶基因,实现其在大肠杆菌细胞中异源高效表达,并进行初步酶学性质研究.[方法]基于转录组数据注释,获得脂肪酶基因lip,构建重组基因工程菌Rosetta(DE3)/pET30-lip,利用双温控自诱导方法高效表达蛋白,表达产物(LIP)经Ni-Agarose His亲和层析柱纯化后进行酶学性质研究.[结果]从Aurantiochytrium sp.PKU#SW7中克隆得到一个大小为873 bp的脂肪酶基因(GenBank登录号为KT305964),该酶对p-NPB最适反应温度和pH分别为40℃和8.0.以不同浓度的金属离子Ca2+和Co2+溶液分别保温处理酶液30 min可使酶活提高1.3倍左右;甲醇对脂肪酶的抑制作用不明显.在最适反应条件下对p-NPP与p-NPB的酶活力分别为70.0±3.1 U/mg和102.5士2.6 U/mg.[结论]Aurantiochytrium sp.PKU#SW7脂肪酶具有良好的特性,符合生物柴油生物催化剂基本要求.

关键词：破囊壶菌、脂肪酶、双温控自诱导表达

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资助基金：Public Science and Technology Research Funds Projects of Ocean No.201305022;National Natural Science Foundation of China for Young International Scientists No.31450110424;China Postdoctoral Science Foundation No.2014M560855;Special Innovation Fund for Shenzhen Overseas High-level Personnel No.KQCX201405211502553海洋公益性行业科研专项经费项目No.201305022;国家外国青年专家基金项目No.31450110424;中国博士后科学基金项目No.2014M560855;深圳市海外高层次人才创新创业专项基金项目No.KQCX201405211502553

在线出版日期：2016-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1190-1198