金黄色葡萄球菌A型肠毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

摘要：

[目的]建立一种快速、灵敏、特异的金黄色葡萄球菌A型肠毒素(Staphylococcal enterotoxinA,SEA)检测方法.[方法]以原核表达的可溶性重组SEA蛋白为免疫原,获得特异性强、亲和力高的单克隆抗体作为捕获抗体,同时制备抗SEA兔多抗血清作为检测抗体建立双抗体夹心ELISA (Double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法.[结果]该方法对SEA的线性检测区间为2-128 μg/L (y=1.102x-0.07,R2=0.994),检测下限为1.89 μg/L,与SEB、SEC2和SED之间无交叉反应;鲜奶SEA人工污染试验测定回收率为94％-114％,变异系数小于10％.应用该方法对46株金黄色葡萄球菌水产品分离株和164株奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌分离株的体外培养上清进行检测,阳性率分别为4.4％和50.6％,表明SEA污染普遍存在.[结论]建立的DAS-ELISA方法特异性、灵敏度和稳定性好,为检测SEA的食源性污染提供了有效手段.

关键词：金黄色葡萄球菌A型肠毒素、单克隆抗体、双抗体夹心ELISA

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资助基金：国家高技术研究发展计划863计划No.2012AA101602;National High-Tech R&D Program of China 863 Program No.2012AA101602

在线出版日期：2016-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：687-694