分子伴侣共表达对嗜热环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响

摘要：

[目的]通过优化表达条件,提高嗜热环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的可溶性表达和胞外酶活性.[方法]构建含cgt基因的重组表达质粒pET-28a(+)-ompA-cgt,筛选最适诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(pKJE8、pKJE7、pGr07、pTf16和pG-Tf2,5种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒pET-28a(+)-ompA-cgt共表达),筛选最适分子伴侣质粒,优化共表达条件.[结果]通过SDS-PAGE分析和测定胞外酶活,CGTase基因在大肠杆菌中实现表达,且具有一定量的重组CGTase分泌至胞外;25℃诱导时CGTase的可溶性表达和在胞外上清中的酶活都最高;分子伴侣质粒pKJE8使酶的胞外活性提高了48.6％,效果最为显著;当L-阿拉伯糖浓度为0.5 g/L时,分子伴侣质粒pKJE8使酶的胞外活性提高了68.5％.[结论]通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统提高了环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达和胞外酶活,为该酶进一步相关研究奠定了基础.

关键词：嗜热环糊精葡萄糖基转移酶、可溶性表达、分子伴侣、共表达系统

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资助基金：国家公益性农业科研专项项目No.201303094-05;福建财政社会公益研究项目No.2060302;The Special Fund for Agro-Scientific Research in the Public Interest of China No.201303094-05;Social Research in the Public Interest of Fujian Finance No.2060302

在线出版日期：2016-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：518-526