过表达TatAdCd转位酶对枯草芽孢杆菌脂肪酶分泌的影响

摘要：

[目的]研究过表达枯草芽孢杆菌Tat运输途径的TatAdCd转位酶对促进脂肪酶分泌的影响.[方法]用cdd基因的串联启动子和前导区,替换tatAD-CD操纵子的启动子和前导区,并在染色体sacB基因位点整合表达;采用qRT-PCR方法表征tatAD-CD操纵子的表达水平;用脂肪酶表达质粒pHP13L转化TatAdCd转位酶过表达菌株,构建产脂肪酶重组菌.通过测定脂肪酶活性,以及聚丙烯酰胺凝胶电泳,考察TatAdCd转位酶过表达对脂肪酶分泌的影响.[结果]tatAD-CD操纵子被过表达,其胞内mRNA相对水平提高了185倍.TatAdCd转位酶的过表达,使脂肪酶发酵单位提高了40％.[结论]使用cdd基因的串联启动子和前导区,能够有效地过表达目的基因;枯草芽孢杆菌脂肪酶可以同时经由Sec途径和Tat途径分泌;过表达TatAdCd转位酶,能够显著提高脂肪酶的分泌量.

关键词：枯草芽孢杆菌、脂肪酶发酵、Tat分泌途径、tatAD-CD操纵子、基因表达

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资助基金：National High-Tech R&D Program of China 863 Program No.2012AA02A701国家高技术研究发展计划863计划No.2012AA02A701

在线出版日期：2016-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

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