对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP53B原核表达及抗血清的制备

摘要：

[目的]研究对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)囊膜蛋白sVP53B克隆、表达、纯化及抗血清制备.[方法]根据WSSV囊膜蛋白基因序列,设计引物,PCR扩增出功能序列(Svp53B),构建到pET-16b载体后,转化至大肠杆菌Rosetta2诱导表达,用SDS-PAGE、Westem blotting检测优化表达.表达产物采用Ni-NTA琼脂糖磁珠进行纯化、割胶回收融合蛋白,以纯化的Svp53B-his为抗原,免疫兔子获得多克隆抗体,通过间接ELISA检测抗体的效价.[结果]构建重组质粒pET-16b-Svp53B,在大肠杆菌Rosetta 2中以1 mmol/L IPTG诱导表达量最高,主要以包涵体形式表达.纯化包涵体蛋白免疫兔子,获得多克隆血清,效价达到1:150 000.[结论]原核表达并纯化得到高纯度的WSSV囊膜蛋白sVP53B,制备的兔源多克隆血清亲和力高、特异性好,这对后期进一步研究VP53B与经口侵染相关功能奠定了基础.

关键词：对虾白斑综合征病毒、囊膜蛋白、VP53B、原核表达、多克隆血清

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资助基金：教育部高等学校博士点基金项目No.20133104110006;上海市教委科研创新重点项目No.14ZZ144

在线出版日期：2015-11-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1977-1983