一种快速检测桉树焦枯病菌(Cylindrocladium scoparium)的LAMP体系的建立及应用

摘要：

[目的]建立桉树焦枯病快速有效的环介导等温扩增反应LAMP检测技术.[方法]以桉树焦枯病原菌Cylindrocladium scoparium为研究对象,利用Primer Explorer V4.0设计软件,针对C.scoparium的Beta-tubulin gene特异保守区域设计了一套LAMP特异性引物组(内引物FIP/BIP,外引物F3/B3,环引物LooPF/LooPB),优化并建立了桉树焦枯病原菌的LAMP快速检测体系.[结果]LAMP反应体系为(50 μL):Bst DNApolymerase(8 U)1 μL;甜菜碱溶液(5 mol/L)3.0 μL; dNTPs (2.5 mmol/L) 3.5 μL; 10×Thermopol Ⅱ 2.5 μL; MgCl2 (100 mmol/L)2 μL; FIP/BIP(40 μmol/L)各1μL; F3/B3(10 μmol/L)各0.5 μL; LooPF/LooPB (10 μmol/L)各1μL; DNA模板2 μL;用ddH2O补足体积至50 μL.反应程序为:65℃水浴锅中反应45 min,90℃灭活5min结束反应.特异性检测结果显示,供试的12个样本菌株LAMP产物可以采用肉眼观察、紫外灯照射、添加荧光染料SYBR GreenI以及电泳检测条带4种不同的形式予以区分.DNA灵敏度检测结果显示,建立的LAMP体系检测灵敏度可达到40 μg/L,完全符合田间检测的要求.野外田间时效检测结果显示,无论是利用紫外检测还是电泳检测均可成功地检测出各地区不同生理小种的桉树焦枯病原菌C.scoparium,且检测效果明显.[结论]该LAMP检测是一项能够作为野外基层田间检测的重要技术.

关键词：桉树、焦枯病原菌、环介导等温扩增反应(LAMP)、快速检测、早期诊断

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在线出版日期：2015-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：791-799