猪圆环病毒2型流行株的分离及其感染性克隆的构建

摘要：

[目的]通过分离一株猪圆环病毒2型(PCV2)流行毒株,并构建其感染性克隆,为研究PCV2基因功能提供操作平台.[方法]通过PCR方法,从疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的仔猪淋巴结中鉴定为猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)2型阳性.把阳性病料接种PK-15细胞传代培养,在培养物中扩增出PCV2的全基因序列.对扩增出的全序列进行序列测定,并与GenBank中公布的5株广东PCV2分离株(GD-pz、GD-gj、GD-jm、GD-ss和GD-sz)进行同源性分析.通过EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ将PCV2全基因组序列克隆进pUC 18载体中,获得含PCV2 GD-zq株全基因组单拷贝的重组质粒pPCV2-GD-zq,再通过SalⅠ和Hind Ⅲ把另一个全长拷贝克隆进pPCV2-GD-zq质粒中,使PCV2 GD-zq株基因组DNA以头尾相接的双重复方式克隆进pUC 18载体中,获得重组质粒pPCV2-2GD-zq.将pPCV2-2GD-zq DNA纯化和定量后转染PK-15细胞,拯救PCV2 GD-zq病毒.[结果]从PMWS感染的猪淋巴结中分离到了一株PCV2,命名为GD-zq株;序列分析结果显示,GD-zq株全基因组为1 767 bp,与GenBank中公布的5株广东PCV2分离株ORF1核苷酸一致性为97.1％-99.7％,编码氨基酸一致性为98.7％-100％; ORF2核苷酸一致性为93.2％-99.6％,编码氨基酸一致性为92.3％-99.1％;全基因一致性为96.0％-99.6％. pPCV2-2GD-zq质粒转染PK-15细胞后,其通过间接免疫荧光实验(IFA)能从转染细胞及其传代细胞中,检测到拯救出的病毒.[结论]分离了一株PCV2广东株GD-zq,成功构建了PCV2 GD-zq株的感染性克隆.

关键词：猪2型圆环病毒、全基因、感染性克隆、序列分析

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在线出版日期：2014-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1168-1174