油气田土壤甲烷氧化菌实时荧光定量PCR检测技术的建立与应用

摘要：

[目的]建立快速检测甲烷氧化菌含量的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术,用于油气微生物勘探.[方法]以含有甲烷氧化菌功能基因pmoA片段的重组质粒为标准品,优化实验条件,建立标准曲线,进行敏感性、重复性和特异性评价,并将该技术用于实际样品的检测.[结果]该技术标准曲线的相关系数R2为0.999 9,扩增效率为99.976％,检测范围为3.897×101-3.897×109 copies/μL,检出限约为40 copies/μL,重复性实验中CT值的变异系数优于3％,对12种非甲烷氧化菌均没有扩增,显示该技术具有很好的敏感性、重复性和特异性.利用该技术对气田、油田和非油气田土样进行了检测,发现气田具有明显的异常高值.[结论]为油气田的勘探建立了一种高效、特异、灵敏、准确的甲烷氧化菌荧光定量PCR检测技术,同时为其它指示菌检测技术的建立提供了参考.

关键词：甲烷氧化菌、实时荧光定量PCR、pmoA基因、油气田土壤

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在线出版日期：2014-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1071-1081