鸽β-防御素1基因的克隆及其生物学作用鉴定

摘要：

[目的]从鸽子组织中克隆鸽子β-防御素1 (AvBD1)基因,在大肠杆菌中表达重组鸽子AvBD1蛋白,测定其生物学特性.[方法]应用RT-PCR法从鸽子骨髓组织中扩增鸽子AvBD1基因,采用Real-time PCR法检测该基因在鸽子组织器官中的表达分布.将该基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pProEX-HTa的EcoR Ⅰ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pProEX-pigeon AvBD1,将重组质粒进行诱导表达;对该重组蛋白进行纯化,通过菌落计数法测定其体外抗菌活性与理化特性.[结果]从鸽子骨髓组织中克隆到鸽子AvBD1基因,其cDNA大小为198 bp,编码65个氨基酸,经序列相似性分析,鸽子AvBD1与鸭AvBD1氨基酸序列相似性最高(81.5％).鸽子AvBD1主要分布于免疫系统和消化系统组织中.Tricine-SDS-PAGE电泳结果表明,重组鸽子AvBD1蛋白分子量约8.8 kD,与预期大小一致.该重组蛋白具有广谱抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性.此外,该重组蛋白的溶血活性极低.[结论]从鸽子骨髓组织中克隆到鸽子AvBD1基因,其主要分布在机体的免疫系统和消化系统中.该重组蛋白具有广谱抗菌活性,高盐浓度显著降低其抗菌活性,且该重组蛋白的溶血活性极低.

关键词：鸽子AvBD1、重组蛋白、抗菌活性、组织分布

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资助基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金;黑龙江省应用技术研究与开发计划项目PC13S02

在线出版日期：2014-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：636-645