荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路影响的研究

摘要：

[目的]探索猪链球菌2型感染后单核/巨噬细胞启动信号转导通路机制,探讨荚膜唾液酸对细菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的影响.[方法]以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,采用RT-PCR、Western blotting、免疫荧光和ELISA法分别检测猪链球菌2型野毒株、唾液酸缺失突变株、唾液酸回复突变株感染后不同时间点巨噬细胞TLR2 mRNA转录水平、AKT磷酸化水平、NF-κB激活程度以及前炎症因子TNF-α分泌水平；再分别用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂预处理巨噬细胞,检测上述分子的表达水平.[结果]唾液酸缺失株可选择性的活化信号转导通路途径.RT-PCR结果表明,缺失株TLR2 mRNA表达水平自1h开始升高,1.5 h达高峰后有所下降；Westernblotting显示,缺失株TLR2蛋白表达水平7h达高峰,9h下降；p-AKT水平1.5-5 h持续稳定在高峰水平,7h后开始下降；免疫荧光可见15 min NF-κB激活-核转运程度较高；ELISA结果显示,10h之后TNF-α的水平显著高于野生株和回复株.使用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂,三菌株通路活化程度均明显受抑制.[结论]荚膜唾液酸可抑制宿主免疫细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的激活,藉此参与细菌逃避宿主的免疫防御作用.

关键词：猪链球菌2型、巨噬细胞、荚膜唾液酸、信号通路

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资助基金：国家自然科学基金项目31170124,30972638,81071317,81171527,81172794;江苏省自然科学基金项目BK2011097,BK2011098

在线出版日期：2013-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1058-1067